新稿速递贵州主栽蓝莓品种活性成分及其抗
谢国芳*，王新华，王瑞，金传绪，周笑犁，刘志刚，郑雄
(贵阳学院食品与制药工程学院，贵州省果品加工工程技术研究中心，贵州贵阳，)
摘要：为了解贵州主栽蓝莓品种果实中活性成分含量及其综合抗氧化活性，以贵州规模化种植的粉蓝、圆蓝、巴尔德温和灿烂为试材，测定其9种酚类组分含量、多酚、总黄酮、花色苷，并用FRAP法、总还原力(TRAP)、DPPH法和ABTS法开展体外抗氧化活性评价，采用皮尔森相关性分析对4个品种各项指标进行分析。结果显示：没食子酸、表儿茶素、芦丁、p-香豆酸、槲皮素、儿茶素、鞣花酸、绿原酸、阿魏酸是供试蓝莓果实中的酚类成分较高，4个品种蓝莓果实中活性成分含量差异显著(P0.05)，粉蓝中没食子酸、阿魏酸和总黄酮含量最高，圆蓝中绿原酸、鞣花酸和芦丁含量最高，巴尔德温中槲皮素和花色苷含量最高，灿烂果实中儿茶素、表儿茶素、p-香豆酸和总酚含量最高；4个品种蓝莓果实的抗氧化活性差异显著(P0.05)，灿烂的抗氧化活性指数最高；蓝莓果实中不同活性成分对抗氧化活性差异显著(P0.05)，绿原酸含量对FRAP值具有较强贡献，阿魏酸、多酚和总黄酮含量对TRAP值的贡献极强，没食子酸含量对DPPH值的贡献极强，花色苷含量对ABTS值的贡献较强，抗氧化活性指数(ACI)与表儿茶素和p-香豆酸含量呈现极其显著的正相关(P0.01)。
关键词：蓝莓；活性成分；抗氧化活性；相关性分析
蓝莓又名越橘，富含花色苷、黄酮类化合物，低糖、低脂肪，具有改善视力、提高免疫力和抗氧化等功效[1-3]。年贵州省黔东南州共引入蓝莓4大类30多个品种，现已筛出‘圆蓝’、‘顶峰’、‘芭尔德温’、‘梯夫蓝’、‘灿烂’、‘粉蓝’、‘杰兔’、‘S13’等8个蓝莓品种进行规模化种植[4]。前期研究及文献显示，蓝莓果实中酚类物质含量显著高于花色苷含量，其不同品种和产地对总酚含量影响较大[5-10]，目前，国内外对蓝莓的花色苷的提取、纯化、稳定性、功效及其开发应用等方面报道较为全面[11～15]，而酚类物质的研究仍以总酚、粗提取及其抗氧化活性研究为主，仅DASTMALCHI等、PERTUZATTI等及刘翼翔等对蓝莓果实中酚类组分及其抗氧化活性进行分析[16～18]，发现不同区域和品种果实中酚类组分差异明显，尚无贵州引种蓝莓果实酚类组分的相关报道。本文以贵州省黔东南州规模化种植的粉蓝、圆蓝、巴尔德温和灿烂4个蓝莓品种为试验材料，对总酚、总黄酮及其9种酚类组成成分进行分析，使用DPPH法、ABTS法、FRAP法和总还原力开展体外抗氧化活性评价。
1材料与方法1.1材料与试剂
以种植10年树龄蓝莓为实验树，种植均按照黔东南州《蓝莓栽培与管理技术》实施，年7月14日在麻江县龙奔蓝莓种植基地采摘粉蓝、圆蓝、巴尔德温和灿烂4个品种蓝莓果实，采摘完全成熟(果实呈现深蓝色)、大小均匀的果实；具体按照GB/T—《新鲜水果和蔬菜取样方法》，采摘后以g/盒分装于PE保鲜盒中，贮藏于4℃采样箱中，运回贵州省果品加工工程技术研究中心实验室，保留于-70℃超低温冰箱。
没食子酸(99%)、表儿茶素(≥98.0%)、p-香豆酸(≥99.0%)、槲皮素(≥98.5%)、儿茶素(≥95.0%)、鞣花酸(≥96.0%)、绿原酸(≥98.0%)、阿魏酸(≥99.5%)、甲醇(色谱纯)、三氟乙酸(≥99.5%，色谱纯)，上海阿拉丁生化科技股份有限公司(中国上海)；DPPH、TPTZ、ABTS、GallicAcid、Rutin(99.0%)、Trolox(99.0%)，美国Sigma公司；其他分析剂均为国产分析纯。
1.2仪器与设备
LC-20A高效液相色谱仪，日本岛津公司；UV-型紫外分光光度计，日本岛津公司；超声清洗器(KQDE)，昆山市超声仪器有限公司；IKAA11研磨机，IKA公司(德国)；C18色谱柱(mmx4.6mm,5μm)，Waters公司(中国上海)。
1.3实验方法
1.3.1酚类成分提取
参考白鸽等[19]的方法并作适当修改。称取10g冻果研磨成浆，取2g果浆装入10mL离心管中，加入4.0mL体积分数为70%甲醇溶液，50℃超声波辅助提取30min，冷却后r/min离心15min，将上清液过滤到10mL的容量瓶中，加入3mL体积分数为70%甲醇溶液于残渣中再提取30min，在4℃、1r/min离心10min，合并上清液，用体积分数为70%甲醇溶液定容，用0.45μm的滤膜过滤后待测，取1.0mL转移至进样瓶中等待进样，每个样品3次重复。
1.3.2花色苷、总酚和总黄酮含量测定
花色苷含量测定：采用pH示差法测定，以g鲜样中所含矢车菊素-3-葡萄糖苷量(mg)表示[20]；多酚含量：采用福林-酚比色法测定[21]，以1g鲜样所含没食子酸当量(mg)表示，即mgGAE/g；总黄酮采用比色法，以1g鲜样中所含芦丁当量(mg)表示，即mgRE/g[22]。
1.3.3色谱条件
准确称取9种酚类物质标准品各10.00mg，用甲醇溶解并定容至10.00mL，配制成1.00mg/mL的酚类物质标准品贮备液，保存于-20℃备用。
C18色谱柱(mm×4.6mm,5μm)，溶液A(甲醇)和溶液B(0.3%三氟乙酸)，利用溶液B进行线性梯度洗脱：0～5min，88%B；5～10min，88%～75%B;10～15min，75%B；15～20min，75%～70%B；20～25min，70%B；25～35min,70%～65%B；35～40min，65%B；40～50min，50%B；50～60min，88%B。柱温：30℃；流动相速率：0.8mL/min；进样量10μL；检测器：紫外检测器；波长：nm和nm。
1.3.4抗氧化活性测定
抗氧化能力(FRAP)参照TODOROVIC等的方法，以g鲜样中所含当量Trolox(mmol)的清除能力表示，即mmolTE/g[23]；DPPH自由基清除能力参照TAUCHEN等的方法，以g鲜样中所含当量Trolox的清除能力(mmol)表示，即mmolTE/g[24]；总还原力参照OLIVEIRA等的方法，以g鲜样中所含当量Trolox的清除能力(mmol)表示即mmolTE/g[25]；ABTS自由基清除能力参照SCHAICH等的方法，以g鲜样中所含当量Trolox的清除能力(mmol)表示，即mmolTE/g[23]。
1.4数据处理
用IBMSPSS19.0软件统计分析数据和作图，测定结果用(平均值±标准误差)来表示。实验数据进行单因素差异分析(one-wayanalysisofvariance，ANOVA)，皮尔森相关性分析(pearson′scorrelationanalysis)。
2结果与分析2.1不同品种蓝莓果实中活性成分分析
4个蓝莓中活性成分含量见表1。由表1结果可知，4个品种蓝莓果实中活性成分及其含量差异显著(P0.05)，粉蓝中没食子酸[(.37±52.03)μg/gFW]、阿魏酸[(.95±4.73)μg/gFW]和总黄酮[(3.08±0.01)mg/g]含量最高，粉蓝中没食子酸含量显著高于其他3品种，粉蓝中没食子酸含量是圆蓝[(51.13±1.11)μg/gFW]的14倍，与PERTUZATTI等()的研究结果基本一致[17]，绿原酸[(0.93±0.02)μg/gFW]、香豆酸[(2.78±0.05)μg/gFW]、槲皮素[(2.77±0.02)μg/gFW]含量最低；圆蓝中绿原酸含量[(56.62±2.16)μg/gFW]、鞣花酸[(79.01±3.51)μg/gFW]和芦丁[(30.41±1.88)μg/gFW]含量最高，绿原酸含量接近是巴尔德温[(0.59±0.02)μg/gFW]的倍，鞣花酸含量是灿烂中的9倍，香豆酸、阿魏酸、总酚和花色苷含量最低；巴尔德温中槲皮素[(14.58±0.67)μg/gFW]、花色苷[(.55±2.01)mg/gFW]含量最高，显著高于其他3个品种，其中槲皮素是灿烂果实的5倍，鞣花酸[(74.35±2.65)μg/gFW]和芦丁[(0.59±0.02)μg/gFW]含量与圆蓝果实的无明显差异(P0.05)，绿原酸[(0.59±0.02)μg/gFW]、儿茶素[(2.60±0.19)μg/gFW]和表儿茶素[(1.09±0.38)μg/gFW]和总黄酮[(2.07±0.00)mg/gFW]含量最低；灿烂果实中儿茶素含量[(6.10±0.12)μg/gFW]、表儿茶素[(66.49±2.4)μg/gFW]、香豆酸[(7.57±0.43)μg/gFW]和总酚[(26.32±0.38)μg/gFW]显著(P≤0.)高于其他3个品种，总酚含量是圆蓝[(12.79±0.57)mg/gFW]的2倍，表儿茶素含量是巴尔德温[(1.09±0.38)μg/gFW]的60倍，鞣花酸[(8.52±0.38)mg/gFW]、槲皮素[(2.54±0.06)mg/gFW]含量最低；粉蓝与灿烂中花色苷含量差异不显著(P0.05)。
表1不同品种蓝莓果实中活性成分分析
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